Генетическое исследование эмбриона при эко. Преимплантационная генетическая диагностика (ПГД) Для ЭКОшечек. Этапы проведения ПГД

Многих потенциальных родителей, планирующих оплодотворение in vitro, занимает вопрос: ПГД при ЭКО - что это? В чем суть этой процедуры и так ли она важна и безопасна, как утверждают врачи?

В сокращении ПГД зашифровано название эмбрионального исследования - предимплантационной генетической диагностики. Благодаря этой процедуре можно с уверенностью гарантировать успешное осуществление ЭКО. В ходе анализа ПГД производится тщательная проверка каждого из эмбрионов на наличие генетических аномалий.

Но так ли необходимо это исследование в цикле ЭКО? Может быть, без ПГД можно обойтись? Выбор всегда за будущими родителями, но следует помнить - осторожность никогда не бывает чрезмерной. Особенно в таком деле, как зачатие в лабораторных условиях. Не стоит полагать, что если процесс культивирования эмбрионов прошел успешно, то благополучный исход всей процедуры ЭКО неизбежен. Нет никакой гарантии, что все полученные зародыши не имеют аномалий генетического характера и обладают достаточной жизнестойкостью. Перенос неполноценных эмбрионов может спровоцировать:

• отклонения в развитии у детей, появившихся благодаря ЭКО;
• невозможность имплантировать зародыш;
• самопроизвольное прекращение беременности;
• замирание плода.

ПГД существенно повышает шанс на рождение в результате ЭКО абсолютно здорового малыша.

Плюсы ПГД

Главное достоинство ПГД – возможность проанализировать состояние здоровья эмбриона, предназначенного для ЭКО до имплантации в полость матки. Предимплантационная генетическая диагностика позволяет:

• удвоить процент успешных имплантаций в ходе ЭКО;
• минимизировать шанс возникновения отклонений генетического плана;
• на 25% снизить вероятность прерывания беременности;
• отобрать наиболее жизнеспособного эмбриона для ЭКО;
• отсеять эмбрионы с генетическими отклонениями;
• определить причины неудачи предыдущего ЭКО;
• определить резус-фактор;
• предотвратить не планируемую многоплодную беременность;
• выявить наличие лишних либо отсутствующих хромосом;
• установить пол будущего ребенка, с целью предотвращения передачи в ходе ЭКО болезней, привязанных к полу.

Показания к ПГД при ЭКО

Кандидатами на прохождение ПГД эмбриона становятся пары, с высоким риском передачи генетических отклонений. Диагностика при ЭКО необходима, если:

• хотя бы у одного из двух родителей присутствуют заболевания генетического характера;
• возраст матери превышает 40 лет;
• отцу больше 45 лет – с возрастом повышается количество сперматозоидов с отклонениями;
• в прошлом уже имели место безуспешные попытки ЭКО;
• проблемы сперматогенеза у мужчин;
• оплодотворение ЭКО ИКСИ;
• гибель имплантированного зародыша во время предыдущих беременностей по причине несовпадения резус-фактора.

Методики предимплантационной генетической диагностики эмбрионов

Практикуются различные разновидности ПГД в ходе проведения ЭКО. Каждое из них преследует определенные цели и имеет принципиальные отличия.

Варианты ПГД

FISH – способ молекулярно-генетического анализа. Этот метод позволяет исключить несбалансированные хромосомные отклонения зародыша, предназначенного для ЭКО - измененное число хромосом (анеуплодию) и структурные изменения (транлокации). Извлеченный в ходе биопсии бластомер помещается на стекло и подвергается нагреву до нужной температуры. Затем происходит его постепенное охлаждение. В результате нарушается целостность оболочки. Для ПГД характерно применение FISH-зондов. Это своеобразные флуоресцентные метки, которыми помечают участки ДНК. Затем с помощью специального микроскопа определяют число хромосом и выявляют аномально развивающиеся структуры.

NGS – революционный способ диагностики, который позволяет исследовать сразу 23 пары хромосом. Из-за сложности данного вида ПГД цена на услугу достаточно высока. Ошибки данного метода незначительны – в пределах 0,1%. Диагностика происходит в криоцикле ЭКО без применения биопсии. Позволяет точно установить наличие генетической патологии путем исследования последовательности ДНК. В процессе выявляются имеющиеся мутации, аномалии моногенного характера, транслокации. Это наиболее дорогой способ ПГД при ЭКО.

PCR – методика полимеразной цепной реакции. Является ведущим способом ПГД для выявления моногенных отклонений. ДНК подвергают денатурации, с целью раскручивания двойной цепи. Затем извлекают фрагмент нуклеотида и с помощью специфических ферментов удваивают количество исходного материала и выявляют дефекты в структуре хромосом. ПГД показана, в случаях, когда один или оба потенциальных участников ЭКО выступают в роли носителей больных генов, с целью исключения передачи их ребенку.

CGH – методика сравнительной геномной гибридизации. Один из самых эффективных и дорогостоящих вариантов ПГД. В процессе исследования происходит гибридизация аналогичных цепочек ДНК в единую молекулу для их сравнения. Исследуемая и контрольная ДНК в процессе ПГД помечаются разными флуоресцентными красителями. Компьютерный анализ в ходе ПГД позволяет выявить различные дефекты - утрату, дублирование или перенос участка хромосомы (делеции, ампфликации, транслокации и другие типы мутаций).

Приведенные методы ПГД не являются взаимозаменяемыми и применяются для выявления разных отклонений. Определить актуальность той или иной процедуры для каждого конкретного случая может только врач, проводящий ЭКО.

Этапы проведения ПГД

Если в ходе ЭКО возникла необходимость проведения ПГД, пара получает консультацию специалиста – генетика. Будущие родители обследуются на кариотип, наличие мутаций. Выявляются показания к проведению ПГД. Далее врач консультирует пару в отношении ключевых особенностей диагностической процедуры в ходе ЭКО.

Стадии диагностики

На первом этапе происходит стимулирование женщины гормонами и трансвагинальное извлечение яйцеклеток – по стандартному плану ЭКО. Введение сперматозоида в женскую клетку способом ИКСИ. Этот прием используется по причине необходимости отсеять сперматозоиды не принимающие участия в процессе ЭКО.

Проведение биопсии для ПГД с извлечением бластомера и его последующей фиксацией. На третий день от зародыша отсекают одну из сформировавшихся 8 клеток. Процедура производится с помощью механического, лазерного или химического способа. Клетки в этот период не дифференцированы и являются идентичными. У каждой из них есть полный набор генетического материала. Поэтому биопсия не мешает оставшейся группе клеток полноценно развиваться.

Проведение ПГД с помощью показанных методов. Исследование продолжается не более 2 дней. На 5-е сутки эмбрион больше не может оставаться в инкубаторе. Необходимо в кратчайшие сроки произвести анализ и представить результаты ПГД для осуществления переноса зародыша в матку матери.

Результаты ПГД

По итогам проведенной диагностики эмбриональные единицы с патологическими изменениями хромосом отсеиваются. Результат напрямую зависит от возраста будущей матери. При ПГД зародышей женщины, находящиеся в репродуктивном периоде – до 40 лет отбраковывается приблизительно 15-20%. В возрасте свыше 40 при наличии прошлого опыта неудачных ЭКО и генных мутаций у самих родителей все 100% могут оказаться непригодными для имплантации.

Стоимость услуги ПГД эмбрионов

ПГД – дорогая процедура, но при определенных показаниях она просто необходима для успешного завершения цикла ЭКО. Она избавляет от риска неудачной подсадки, воспроизведения больного потомства. По сути, она экономит деньги, которые в случае неудачи могли бы понадобиться на повторную процедуру ЭКО, а в случае рождения малыша с генетическим отклонением на лечение и уход за ним.

Стоимость ПГД в Москве в "Центр ЭКО" варьируется в зависимости от метода исследования и количества диагностируемых эмбрионов. Значительная стоимость ПГД обусловлена повышенной сложностью процедуры и использованием дорогого оборудования, препаратов и расходных материалов.

Если в анамнезе есть неудачные подсадки, или у пары уже рождались дети с генетическими аномалиями, ПГД просто необходима. Чтобы произвести ЭКО с ПГД в Москве, обратитесь в нашу клинику по телефону или запишитесь на консультацию к специалисту по ЭКО через специальную форму на нашем сайте.

Начните свой путь к счастью - прямо сейчас!

В настоящее время идет бурное развитие во всех сферах разнообразных инновационных технологий, технический и научный прогресс не прошел и мимо медицине. В сфере репродуктологии врачи добились колоссальных успехов. Сейчас обыденным являются различные методы вспомогательных репродуктивных технологий, хотя раньше человечество о таком и мечтать не могло. Одним из видов таких технологий является использование метода экстракорпорального оплодотворения. Это дает надежду всем бесплодным парам, которые уже испробовали все методы лечения и способы зачать ребенка, но которые были только пустой тратой времени. Протокол экстракорпорального оплодотворения имеет ряд довольно сложных медикаментозных схем и манипуляций, является трудоемким процессом, а так же сопровождается значительным психо-эмоциональным напряжением для женщины и семьи в целом. Не такой редкостью сейчас для врачей являются различные врожденные пороки развития плода, хромосомные аномалии. Которые выявляются на первом, на втором скринингах, а некоторые могут быть выявлены уже после рождения ребенка даже в случае самопроизвольно наступившей беременности. Поэтому одной из главных задач в современной репродуктологии является развитие отрасли выявления различных патологий развития эмбриона еще до стадии его переноса в полость материнской матки. С этой целью врачи-репродуктологи используют, так называемую, ЭКО с ПГД . ЭКО с ПГД в Москве доступно так же, как и в других крупных городах Российской Федерации.

Генетический анализ эмбриона пгд эко

Что это такое и в чем суть методики?

ПГД расшифровывается как предимплантационная генетическая диагностика - генетический анализ эмбриона при ЭКО на стадии его культивирования вне организма матери. При помощи этого исследования эмбриологами отбираются эмбрионы с неудовлетворительными показателями и исключаются как материал для переноса. Дальнейшая работа продолжается с качественными эмрионами без каких-либо генетически отклонений. Риски развития ребенка с какими-либо генетическими аномалиями сводится к минимуму.

Однако, не всем и не всегда предлагается проведение предимплантационного исследования. Выделяют группу факторов, при наличии которых, протокол ЭКО подразумевает проведение такого исследования.

К ним относятся:

1. Если, вступающая в протокол экстракорпорального оплодотворения, женщина достигла возрастной планки в 35 лет, то риски развития генетических аномалий повышаются в разы, в отличии от женщин, моложе этого возраста;
2. По такой же причине исследованию подлежат эмбрионы, которые были получены путем оплодотворения сперматозоидами мужчины, возраст которого более 45 лет. С каждым годом риски повышаются;
3. Наличие в анамнезе гибели плода по причине резуз-конфликтной беременности;
4. Отягощенный наследственный анамнез хотя бы у одного супруга из пары. Так как высок риск наследственной передачи генов, кодирующих генетическое патологическое состояние.
5. Наличие в репродуктивном анамнезе нескольких пролетных протоколов экстракорпорального оплодотворения;
6. Отягощенный акушерский анамнез в виде самопроизвольных абортов. Замерших беременностей. Это объясняется тем, что такие патологические состояния беременности в сроке до 8 недель обусловлены в 80% генетическими и хромосомными аномалиями;
7. В мужской сперме повышено содержание аномальных половых клеток – сперматозоидов.

Данная диагностика позволяет выявить достаточно большое количество нозологических единиц, таких как ахондроплазию, муковисцидоз, синдромы Дауна, Эдвардса, Патау и множество других аномалий.

Диагностика требует значительного число фолликулов. Поэтому при ПГД женщине делают повышенную стимуляцию яичников.

Чего же врачи-репродуктологи хотят добиться, используя столь сложную и трудоемкую методику:

К ним относяться биохимический и ультразвуковой скрининг, которые рассчитывают риски рождения ребенка с патологиями развития. При выявлении высоких показателей пренатального скрининга. Женщина должна быть отправлена на инвазивные методы диагностики, такие как амниоцентез – забор околоплодной жидкости с целью получения материала для исследования кариотипа, кордоцентез – исследование пуповинной крови.

Плюсы и минусы ЭКО ПГД

Пренатальная генетическая диагностика имеет как положительные. Так и отрицательные стороны.

К положительным можно отнести:

1. Проведение генетического исследования и с уверенностью в 95% перенести в полость матки при проведении протокола экстракорпорального оплодотворения здоровых, жизнеспособных эмбрионов.
2. Возможность получения потомства такого пола, какого хотят родители.
3. Положительным является возможность профилактировать резус-конфликты, а так же гемолитические осложнения этих патологических состояний.
4. Предотвратить самопроизвольное прерывание беременности по причине хромосомный, генетических аномалий, которые в 80% прерываются в сроках до 8 недель.
5. Из-за отсутствия осложнений, связанный с разнообразными генетическими аномалиями программа экстракорпорального оплодотворения в больших случаях заканчивается успехом.
6. Врожденные пороки практически полностью исключаются.
7. Еще один, немало важный момент, на который имеет огромное влияние получение данных предимплантационной диагностики – это психо-эмоциональный покой женщины. Бедующая мама, даже та, которая получила самопроизвольно наступившую беременность, в силу доступности разнообразной информации, переживает по поводу рождения ребенка с каким-либо пороком развития. Данные патологические состояния с каждым годом все больше и больше встречаются среди рожденных детишек в силу самых разнообразных причин. Поэтому мама, получившая ответ, который на 95% гарантирует ей рождение здорового ребенка, будет чувствовать себя спокойно, уверенно и ее психологический настрой не будет влиять на возникновение тонуса матки и, соответственно, снизиться риск самопроизвольных абортов, угроз прерывания беременности, угрозы преждевременных родов.

Как и у любого метода, как и у медали, есть две стороны, как есть хорошие моменты, так и отрицательные:

1. Совсем ничтожный, но риск повреждения эмбриона остается, равен он 1%. Но 99% успеха при проведении этой процедуры их полностью оправдывает.
2. Все же, несмотря на высокую информативность метода, остается небольшой процент – около 5 погрешности. Эти пропущенные моменты корригируются при проведении скрининговых исследований.
3. Значительным минусов у предимплантационной генетической диагностики является ее цена. Стоимость ПГД при ЭКО составляет около 60 тысяч рублей и выше в зависимости от клиники и метода диагностики.

В некоторых видах ПГД при ЭКО цена достигает цифр 140 тысяч рублей. Дороговизна данного метода зависит от очень дорогостоящего оборудования, а так же реактивов для проведения анализов, которые используются для выявления патологий развития плода. В ЭКО с ПГД стоимость так же зависит от количества исследуемых эмбрионов, а так же количества нозологических единиц, которые будут исследоваться.

Однако, эта стоимость никогда не сравнится с ценой человеческой жизни. А особенно жизни еще нарождённого ребенка.

Методики ЭКО с ПГД - стоимость

Различают различные методики проведения предимплантационного генетического исследования. К ним относятся:

• Метод исследования, кодированный аббревиатурой «FISH» - это метод флюоресцентной гибридизации, который подразумевает исследование молекулярно-генетического вида. Весь генетический материал находится в ядрах каждой клетки. Целесообразно проводить диагностики в определенные периоды деления клеток, а именно в интерфазу либо метафазу. Это наиболее доступный в финансовом плане метод, однако и информативность его наименьшая, так как он не дает возможности исследовать весь хромосомный набор, что является довольно отрицательной особенностью метода.
• Методом. Который дает возможность исследовать весь хромосомный набор является CGH – метод сравнительной геномной гибридизации. Он позволяет выявить бластоцисты с высоким имплантационным потенциалом. Но есть у него и огромный недостаток – это его цена. Метод является дорогостоящим и не доступным для все семейных пар, вступающих в протокол экстракорпорального оплодотворения.
• Метод ПЦР – полимеразной цепной реакции, так же осуществляет диагностику наследственных заболеваний, в результате мутаций.
• Метод NGS - Now-Generation Sequencing, метод инновационный, который, вскоре, вытеснить все другие методики. Является высокоинформативным и репродуктологи на него возлагают немалые надежды.

Что же женщине придется пережить при проведении генетического исследования? Из каких этапов состоит методика данной диагностической манипуляции?

Сначала семейная пара должна быть консультирована генетиком для полноценного обследования, выявления показаний для предимплантационной диагностики. Далее протокол экстракорпорального оплодотворения проходит без каких-либо особенностей, которые бы затрагивали женщин.

Экстракорпоральное оплодотворение выполняется по плану до момента соединения яйцеклетки и сперматозоида и культивирования эмбрионов. Спустя три дня начинается этап предимплантационной диагностики. В специальных условиях с помощью микроинструментария эмбриологи получают клетки у культивируемых эмбрионов. Метод является безопасным и никаких осложнений, в большинстве случаев, не вызывает.

Затем с отобранным материалом проводятся исследования любым методом из выше перечисленных. Эта стадия является одной из наиболее ответственных, так как от квалификации врача-репродуктолога, от его выбора зависит дальнейшая судьба беременности, еще нарождённого ребенка, матери, а так же все семьи.

После получения результатов, эмбрионы, не соответствующие требованиям отсеиваются, а переносу подвергаются только качественные, жизнеспособные эмбрионы. Подсадка выполняется на 5 день культивирования.

Предимплантационная генетическая диагностика не имеет каких-либо осложнений и частота возникновения неудачного протокола экстракорпорального оплодотворения без ПГТ не отливается от ЭКО с ПГД.

Этот метод является прекрасным способом снизить частоту вынашивания детей с врожденными аномалиями, однако, по определенным причинам, не всегда удается его провести в силу наличия противопоказаний к его применению.

1. Исследуемый эмбрион не имеет шести бластомеров, что является недостаточным для проведения ПГД.
2. У эмбриона диагностированы многоядерные бластомеры;

ЭКО генетическая диагностика - для чего она нужна

В целом, метод является прекрасной профилактикой врожденный пороков развития плода, повышает шансы успешного наступления беременности и дальнейшего вынашивания без угрозы прерывания, даже профилактирует развитие рез-конфликтов, что имеет огромное значение для резус-отрицательных женщин, для которых этот протокол эстракорпорального оплодотворения не является первым либо уже были беременности в анамнезе. Единственным, но очень существенным, минусов является цена процедуры. Не каждая бесплодная семейная пара может себе позволить даже саму процедуру экстракорпорального оплодотворения в силу финансовых трудностей, а уж тем более и дополнительные растраты на предимплантационную диагностику. Но в данный момент есть решение этому вопросу. Согласно Федеральной программе, подав заявку на сайт, семейные пары могут принять участие в программе бесплатного проведения протокола ЭКО с ПГД по ОМС, то есть ЭКО с ПГД стоимость оплаты за проведение данных манипуляций берет на себя фонд обязательного медицинского страхования. Данная программа дарит шанс на светлое будущее отчаявшимся семьям, у которых стоит такой страшный диагноз бесплодия. Не стоит отчаиваться, ведь самое большое счастье теперь стало так близко к Вам.

Преимплантационная генетическая диагностика (ПГД)

представляет собой анализ генетических нарушений у эмбрионов до их имплантации в полость матки . Это новое направление в области генетической диагностики и репродуктивных технологий. Исследование проводится на самом раннем этапе развития человеческого организма, когда возраст эмбриона всего несколько дней и он состоит из нескольких клеток.

Преимплантационная диагностика эмбриона проводится в цикле экстракорпорального оплодотворения до переноса эмбриона в полость матки . Это позволяет предотвратить перенос генетически неполноценного эмбриона. Главным преимуществом ПГД является то, что она проводится еще до наступления беременности.

Впервые преимплантационная генетическая диагностика (ПГД) была проведена в 1990 году. В настоящее время ПГД проводится во многих странах активно развивающих вспомогательные репродуктивные технологии.

ПГД может проводиться в ситуациях, когда имеется повышенный риск того, что эмбрионы будут иметь определенные хромосомные патологии. Такие патологии могут снизить вероятность имплантации (прикрепления) эмбриона в матке, приводить к невынашиванию беременности, замиранию беременности или рождению ребенка с физическими или умственными отклонениями. ПГД помогает предотвратить такой неблагоприятный исход, поскольку позволяет отобрать здоровые эмбрионы до переноса в матку.

Многие пациенты желают заранее выбрать пол ребенка, что тоже можно сделать при помощи ПГД.

В зависимости от цели и методов исследования выделяют три основных направления ПГД:

Диагностика числовых нарушений хромосом (анеуплоидии);
ПГД при транслокациях;
ПГД моногенных дефектов.

В каких случаях проводится ПГД

Женщинам старше 35 лет;
мужчинам старше 39 лет;
супружеским парам после неоднократных неудачных попыток ЭКО;
мужчинам с тяжелыми нарушениями сперматогенеза (единичные сперматозоиды, высокий процент аномальных сперматозоидов и т. д.);
женщинам с привычным невынашиванием в анамнезе (особенно в случаях прерывания беременности на ранних сроках);
неудачные попытки ЭКО в анамнезе (более двух);
супружеским парам с высоким генетическим риском (семейные случаи наследственных заболеваний, аномалии кариотипа).

Диагностика числовых нарушений хромосом (анеуплоидии)

Диагностика числовых нарушений хромосом (скрининг анеуплоидии) позволяет выявить эмбрионы с наличием лишних или отсутствием одной или нескольких хромосом .

В норме весь генетический материал человека распределен в 46 хромосомах (23-х парах). При зачатии половину генетического материала (23 хромосомы) эмбрион получает от матери (хромосомы яйцеклетки), а вторую половину – от отца (хромосомы сперматозоида). Нарушения числа хромосом в половых клетках родителей возникают достаточно часто и будущий эмбрион может получить лишнюю хромосому (это называется трисомией) или может произойти потеря какой-либо хромосомы (моносомия). Такие нарушения носят название анеуплоидии . Эти дефекты приводят к нарушениям развития эмбриона на любом этапе: отсутствию имплантации, самопроизвольному прерыванию беременности или рождению ребенка с тяжелым наследственным заболеванием, например, болезнью Дауна (трисомия по 21-й хромосоме). ПГД проводится для 9 хромосом, у которых чаще всего встречается анеуплоидия. Это хромосомы 13, 15, 16, 17, 18, 21, 22, X, Y. В настоящее время нельзя провести диагностику для всех 23 хромосом.

Причины хромосомных нарушений при образовании гамет (яйцеклеток и сперматозоидов) остаются не достаточно изученными. В то же время известны факторы риска таких нарушений. К ним относится возраст женщины. С возрастом женщины, планирующей материнство, увеличивается риск анеуплоидии яйцеклеток и, соответственно, повышается риск рождения ребенка с трисомией, в частности с синдромом Дауна. Поэтому для беременных старше 35 лет рекомендуется пренатальная (дородовая) диагностика с целью изучения кариотипа (числа и структуры хромосом) плода . Если у плода выявляется хромосомное нарушение, рекомендуется прерывание беременности, поскольку хромосомный дефект фактически не подлежит лечению, и родившийся ребенок будет страдать тяжелым заболеванием с множественными врожденными пороками в отсутствие эффективных методов лечения.

К процедуре ЭКО нередко прибегают супружеские пары, в которых женщина старше 35 лет. Поэтому для них рекомендуется пренатальная либо преимплантационная диагностика. Выявление хромосомных нарушений на эмбриональной стадии при естественной беременности не возможно.При проведении ЭКО первые этапы жизни эмбриона происходят in vitro (вне организма матери), поэтому есть возможность провести исследование хромосом. Это позволяет отобрать для переноса в полость матки эмбрионы с нормальным хромосомным набором, что в свою очередь существенно повышает шансы наступления здоровой беременности. Это также существенно снижает риск того, что потребуется прерывание беременности по генетическим причинам.

Необходимо иметь в виду, что ПГД не заменяет полностью пренатальную диагностику. Известен тот факт, что хромосомные нарушения имеют чаще всего материнское происхождение, в связи с этим при проведении ПГД эффективно проведение анализа не только бластомеров (клеток эмбриона), но иполярных телец (клеток, образующихся в процессе созревания яйцеклетки) . Необходимо учитывать, что возраст женщины старше 45 лет является фактором риска получения малого числа яйцеклеток и, соответственно, малого числа эмбрионов. В этом случае ПГД может оказаться неэффективной и такие факторы служат ограничением применения ПГД.

Мужской фактор бесплодия, а именно тяжелые нарушения сперматогенеза, такие как олигозооспермия, тератозооспермия также рассматривается в качестве показания для проведения ПГД. Считается, что в этом случае повышено число сперматозоидов с хромосомными аномалиями, соответственно, повышен риск анеуплоидии эмбрионов.

Наличие хромосомных перестроек (структурных нарушений) в кариотипе одного из супругов, например, транслокации, являются показанием для проведения ПГД . Считается, что у таких пациентов может быть повышен риск не только специфических хромосомных нарушений, но и риск анеуплоидии по хромосомам, не вовлеченным в перестройку, поэтому в таких случаях рекомендовано сочетать ПГД на транслокации с ПГД на анеуплоидии.

Пациенты могут провести преимплантационную диагностику в цикле ЭКО по собственному желанию без определенных медицинских показаний. Анеуплоидия (нарушения числа хромосом) встречается в эмбрионах человека с высокой частотой даже в норме. Супружеская пара может использовать шанс снижения риска хромосомных нарушений в эмбрионах при проведении ЭКО для уменьшения риска спонтанного прерывания беременности и рождения ребенка с хромосомной патологией.

ПГД при транслокациях

Носительство хромосомных нарушений в кариотипе (например, транслокаций, маркерных хромосом) является фактором риска хромосомных нарушений у потомства. Риск связан с тем, что образуются несбалансированные кариотипы (с недостатком или избытком генетического материала), которые могут приводить к самопроизвольному прерыванию беременности или рождению ребенка с тяжелым заболеванием. Носители транслокаций чаще страдают невынашиванием беременности в супружеской паре или бесплодием (особенно если носитель мужчина).

При наличии структурных нарушений в кариотипе одного из супругов рекомендуется проведение ПГД для выявления эмбрионов, несущих несбалансированный хромосомный материал. Отбор эмбрионов со сбалансированным кариотипом повышает для такой пары шанс забеременеть и родить здорового ребенка приблизительно в 20 раз.

ПГД при структурных хромосомных нарушениях, в большинстве случаев при транслокациях, требует подготовительного этапа, который проводится до вступления в лечебный цикл. На этом этапе подбирается схема тестирования хромосомного нарушения, индивидуальная для конкретной транслокации, проверяется на клетках крови родителя, несущего генетическое нарушение.

FISH - метод исследования несбалансированных хромосомных нарушений эмбрионов

FISH – (fluorescent in situ hybridization - флуоресцентная гибридизация) - метод генетического исследования в случае ПГД при транслокациях , а также в случае ПГД числовых хромосомных нарушений . Для исследования применяются специальные FISH-зонды – метки для определенных участков хромосом, связанные с определенным флуоресцентным красителем. С помощью FISH-анализа выявляются эмбрионы с несбалансированными нарушениями.

ПГД моногенных заболеваний.

ПГД моногенных заболеваний рекомендована для семей с установленной генетической болезнью. Генные (моногенные) заболевания достаточно редки. Но если в семье уже есть ребёнок с генной болезнью, то риск родить ещё одного ребёнка с таким же заболеванием у данной семейной пары высокий. Причиной генной болезни является нарушение или мутация определенного гена (участка ДНК). Родители, являясь носителями мутантного гена, с высокой вероятностью передают его потомству, что приводит к рождению больных детей. К частым генным болезням относят муковисцидоз, фенилкетонурию, адреногенитальный синдром, синдром Вернига-Гоффмана, гемофилию, серповидноклеточную анемию. Предимплантационная диагностика позволяет отобрать эмбрионы без мутаций и может проводиться для генных заболеваний с разным типом наследования: аутосомно-рецессивным, аутосомно-доминантным, сцепленным с полом.

Показанием для ПГД является не любой моногенный дефект, а только высокий генетический риск в отношении тяжелого наследственного заболевания. Для того, чтобы супружеская пара могла планировать ПГД, оба супруга должны быть обследованы в отношении генного дефекта – иметь на руках результаты молекулярно-генетического исследования, мутации должны быть выявлены. При неясном характере наследования, не установленной мутации, планирование ПГД не возможно.

До проведения ПГД моногенного заболевания необходимо проведение подготовительного этапа в ходе которого отрабатывается схема тестирования генетического нарушения, индивидуальная для каждой пары.

Метод исследования генных дефектов в эмбрионах

Основным методом генетического исследования при проведении ПГД моногенных дефектов является полимеразная цепная реакция (ПЦР). Техника ПЦР, применяемая в ПГД, отличается от обычных разновидностей ПЦР, используемых в генетическом анализе. Особенность состоит в малом количестве материала и ограниченном времени исследования. Во время подготовительного этапа проводится выявление информативных маркеров и разработка схемы анализа этих маркеров совместно с мутацией на единичных клетках. Для генетических исследований подготовительного этапа необходима кровь обоих супругов, а также может потребоваться кровь родственников . Какой именно потребуется биологический материал определяет врач-генетик. Проведение ПГД моногенного заболевания можно сочетать с диагностикой хромосомных нарушений у эмбрионов. При ПГД моногенного дефекта проводится анализ нарушения определенного гена. Но для всех эмбрионов человека характерен достаточно высокий неспецифический риск других генетических нарушений – числовых хромосомных нарушений (анеуплодия).

Как проводится ПГД?

Проведение преимплантационной диагностики возможно только в рамках лечебного цикла ЭКО/ИКСИ . Подготовка к лечебному циклу и сам лечебный цикл ЭКО с ПГД практически не отличаются от обычного лечебного цикла: женщина получает гормональные препараты для стимуляции суперовуляции, производится трансвагинальная пункция фолликулов, оплодотворение яйцеклеток сперматозоидами в условиях эмбриологической лаборатории. Перенос эмбрионов проводится на 5-6 сутки. Особенностью лечебного цикла является то, что при проведении циклов ЭКО с ПГД применяется процедура ИКСИ. Это необходимо в связи с тем, что при обычном ЭКО к яйцеклетке добавляется большое количество сперматозоидов. Затем, при заборе полярных телец или бластомеров, есть риск попадания в анализ вместе с клеткой эмбриона генетического материала сперматозоида, не участвовавшего в оплодотворении.

Преимплантационная генетическая диагностика проводится после получения фолликулов и оплодотворения, в период развития эмбриона in vitro, до переноса в полость матки. Материалом для генетического исследования при проведении ПГД является генетический материал яйцеклетки и эмбриона . Генетический материал яйцеклетки, полученной в программе ЭКО, исследуется по полярным тельцам и бластомерам (эмбрион из 6-8 клеток) с помощью биопсии эмбриона.

Считается, что такая процедура не нарушает дальнейшего развития эмбриона.

В то время пока выполняется генетическая диагностика, эмбрионы продолжают развиваться в инкубаторе в соответствующей питательной среде до переноса в полость матки на 5-е сутки развития. К этому времени эмбрион должен достичь стадии бластоцисты. Перед переносом эмбриолог оценивает строение и форму эмбрионов (морфологию). Результат генетической диагностики сопоставляется с морфологией эмбрионов и делается заключение о том, какие эмбрионы рекомендуются для переноса в матку. Для переноса отбирают самые лучшие по морфологическим характеристикам эмбрионы без генетических нарушений. Генетические исследования, выполняемые в рамках ПГД, высокотехнологичны. Анализ проводится на очень малом количестве материала – на забранных с помощью биопсии полярных тельцах и бластомерах – и в очень сжатые сроки. Для анализа бластомеров отводится всего 2 суток. Эмбрион не может продолжать свое развитие вне организма матери далее стадии бластоцисты (5-е сутки после оплодотворения), поэтому исследование обязательно должно быть выполнено за это короткое время.

Для проведения предимплантационной диагностики применяются с одной стороны новейшие, с другой стороны - проверенные методы генетических исследований. Для ПГД числовых хромосомных нарушений, ПГД при транслокациях применяется метод FISH (флуоресцентная гибридизация). При проведении ПГД моногенных заболеваний – метод ПЦР .

Диагностика генетических нарушений по полярным тельцам

При созревании женской половой клетки (ооцита) происходит её деление для распределения генетического материала. Во время этого деления ооцит распределяет хромосомный материал 2 раза. В первый раз хромосомный материал (46 хромосом) удваивается и разделяется между двумя клетками. Одну из этих клеток называют первое полярное тельце. Затем вторая клетка проходит ещё один цикл деления, но уже без удвоения генетического материала, и распределяет свой генетический материал в равном количестве (по 23 хромосомы) между дочерними клетками. Одна клетка становится яйцеклеткой, а вторая – вторым полярным тельцем. Полярные тельца характерны для зрелой яйцеклетки и не принимают дальнейшего участия ни в оплодотворении, ни в развитии эмбриона. Эти два полярных тельца можно исследовать, чтобы установить унаследовала ли генетический дефект яйцеклетка, или генетический дефект попал в полярное тельце.

Безопасность ПГД

Многих будущих родителей волнует вопрос: «Может ли навредить ПГД здоровью ребёнка?». Забор бластомера производят на третий день, когда клетки будущего ребёнка ещё универсальны, недифференцированы и одни клетки без ущерба для его здоровья заменяются другими . Забор полярных телец считается еще менее инвазивным для эмбриона. Риски использования ПГД связаны, главным образом, с общими рисками программы ЭКО (например, риск развития синдрома гиперстимуляции яичников).

Преимущества преимплантационной диагностики:

Выбор и перенос в матку только тех эмбрионов, которые не имеют хромосомных патологий
Снижение риска рождения ребенка с определенными генетическими дефектами
Снижение риска невынашивания (примерно в 2 раза)
Снижение риска многоплодия (примерно в 2 раза)
Увеличение шанса на успешную имплантацию (примерно на 10%)
Увеличение шансов на благополучное рождение ребенка (примерно на 15-20%)

РИСК при проведении предимплантационной диагностики:

Риск случайного повреждения эмбриона (<1%)
Ошибочная диагностика (до 10%)
3,5% вероятности того, что эмбрион с патологией будет диагностирован как нормальный
10% вероятности того, что здоровый эмбрион будет диагностирован как эмбрион с патологией
Отмена переноса эмбрионов из-за того, что по результатам ПГД во всех эмбрионах будет обнаружена патология (до 20%)

В ходе беременности возможно проведение диагностических исследований, позволяющих определить, нормально ли развивается плод. Диагностика ряда патологий возможна с помощью амниоцентеза или биопсии ворсин хориона (забор клеток жидкости или тканей, окружающих эмбрион). Исследование амниотической жидкости и ультразвуковое исследование могут обнаружить определенные патологии центральной нервной системы плода или других органов. Вам необходимо обсудить возможность проведения этих исследований со своим акушером-гинекологом, наблюдающим беременность. Эти исследования не являются на 100% достоверными.

Как и в случае естественного зачатия, при проведении ЭКО не существует гарантии того, что не родится ребенок с невыявленными физическими или психическими отклонениями. Имеющиеся на сегодняшний день данные указывают на то, что риск развития патологий у детей после экстракорпорального оплодотворения (ЭКО) не выше такого риска после естественного зачатия.

Для многих родителей рождение ребенка – это очень желаемое и долгожданное событие. Особенно, если пара не может обзавестись потомством в течение длительного времени. На втором месте для мамы и папы, после факта рождения, стоит хорошее здоровье малыша. Если при естественном зачатии «заказать здоровье» проблематично. Необходимы определенные действия со стороны будущих родителей, начиная от отказа вредных привычек, закачивания проведение обследований до беременности. Но даже такое правильное поведение не дает необходимой гарантии. При процедуре ЭКО с ПГД родить здоровое потомство проще. Врач перед проверяет их генетическую информацию. По результатам в матку попадают только здоровые эмбрионы, а плохие отсеиваются.

Сначала вспомним, что такое ? ЭКО – это процедура экстракорпорального оплодотворения. Она отличается от естественной процедуры зачатия тем, что эмбрионы оплодотворяются вне тела женщины, а потом помещаются внутрь матки. Успех ЭКО во многом зависит от умения и опыта врачей. Не на последней ступени по важности находится здоровье будущей мамы и генетического отца.

ПГД при Эко что это? Расшифровываем по буквам: предимплантационная генетическая диагностика. С ее помощью эмбрион диагностируются еще до переноса в тело женщины. ПГД проводят совместно с программой ЭКО. Проводя диагностику, врач заранее исключает наличие у будущего ребенка генетических патологий. Так как в полость матки подсаживается практически здоровый эмбрион, риск самопроизвольного выкидыша сводится к минимальному значению.

При каких условиях необходимо провести ПГД

Подобную диагностику проводят не всегда. С ней значительно увеличивается стоимость ЭКО. Но при некоторых условиях, она является обязательной. Перечислим их:

1. Будущей маме больше 35 лет. Доля генетически нормальных эмбрионов с возрастом снижается, а аномальных сильно возрастает.
2. Генетическому отцу более 45 лет.
3. Уже была смерть детей от несовместимого резус-фактора.
4. Будущие родители имеют генетические заболевания, то есть возникает серьезный риск получить генетически нездорового малыша.
5. Бездетная пара уже имела несколько неудачных попыток искусственного оплодотворения.
6. Были случаи самопроизвольного прерывания беременности на сроки 4-8 недель.
7. У мужчины обнаружились серьезные нарушения сперматогенеза или высокое содержание аномальных сперматозоидов.

Процедура ПГД помогает выявить достаточное количество генетических заболеваний. Проводя исследование хромосомного набора зародыша, врач может обнаружить более 150 болезней. К их числу относят: болезнь Гоше, миодистрофию, ахондроплазию, гемофилию, болезнь Геттингтона, Х-ломкой хромосомы, пузырчатку, ретинобластому, нейрофиброматоз, анемию Фанкони, синдромы Дауна, торзионную дистонию, поликистоз почек, миопатию, муковисцидоз, Альперта, пигментозный ретинит, Эдвардса, фенилкетонурию.

Диагностика требует значительного число фолликулов. Поэтому при ПГД женщине делают повышенную стимуляцию яичников.

Цели ПГД

Если по показаниям необходима описываемая диагностика, то далее действия врачей будут направлены на достижение следующих целей:

• Существенное снижение риска получения генетически нездорового ребенка.
• для того, чтобы исключить зачатие ребенка с болезнью связанной с половой принадлежностью.
• Установление резус-фактора, который поможет исключить гемолитические отклонения у зародыша.
• Выявление информации, почему имплантация не произошла при предыдущих попытках ЭКО.
• Сразу отсеять зародыши, которые поражены неизлечимыми заболеваниями.
• Подбор необходимой генетической информации, которая в дальнейшем поможет выступить ребенку донором больной сестре или брату.

Насколько точна процедура ПГД

Преимплантационная диагностика доказала свою точность. Вероятность возможной ошибки не превышает 5%. Кроме этого, после наступления беременности женщине назначают и проводят комбинированные скрининги. Если вдруг они дадут недопустимый процент , ей проводят инвазивную пренатальную диагностику.

Две стороны ПГД: положительная и отрицательная

Если говорить о положительной стороне, то это:

1. Возможность сразу установить и «заказать» пол ребенка.
2. Получение здорового малыша, благодаря подсадке только хорошего материала.
3. Повредить зародыш очень трудно, риск составляет менее 1%.
4. Возможность предотвращения конфликта разус-факторов.
5. Исключается аборт по причине выявленных генетических отклонений.
6. Процедура совершенно безвредна для эмбриона. На этой стадии развития клетки полностью взаимозаменяемы. Взятые для процедуры бластомеры легко замещаются новыми.
7. Успешность программы ЭКО повышается в несколько раз.
8. Врожденные пороки практически полностью исключаются.
9. Отличная возможность помочь родной сестре или брату, благодаря подбору необходимого совместимого материала.

Плюсы процедуры ПГД перед ЭКО впечатляют, но тоже существенны. Отрицательная сторона проявляется в следующих факторах:

1. Небольшой, но все же, риск повреждение зародыша. От него не избавишься и он может наступить.
2. Вероятность получения неправильных результатов. Иногда здоровые эмбрионы принимаются за нездоровые. Их отсеивают в сторону. Получается, что в матку подсаживают материал с неправильной информацией. Чтобы исключить такой негативный фактор, проводят скрининг, который позволяет выявить подобную информацию на достаточно раннем сроке беременности.
3. Присутствует риск в 3-5 % получения нездорового малыша.
4. Процедура ПГД очень дорогая.

Цена ПГД

Преимплантационная генетическая диагностика стоит немало. Ценовой промежуток начинается от 50 000 и заканчивается 130 000. В цену входят дорогостоящее оборудование и современные недешевые материалы. Так же стоимость зависит от количества эмбрионов, которые будут исследоваться. Решившись на процедуру ПГД можно заказать обследование по одной патологии или провести диагностику по полной программе. Если процедуру делают специалисты высшего класса на профессиональном оборудовании, вероятность желаемого положительного исхода повышается.

На дороговизну ПГД можно посмотреть и с другой стороны. Если существует высокий риск получения генетически нездорового малыша, то он может с большей вероятностью родиться. Нездоровому ребенку пожизненно будет необходим специальный уход, недешевое лечение и общее содержание. Плюс душевные муки родителей, страдающие за свое чадо, будут беспокоить их всегда. Все это в совокупности существенно превышает названную стоимость ПГД. Получается все-таки, что ПГД лучше провести.

Методы ПГД

Врачи практикуют четыре способа ПГД. Это FISH, CGH, PCR, NGS. Рассмотрим их по отдельности.

Метод FISH

Расшифровывается он как флуоресцентная гибридизация in situ. Или по-другому его можно назвать молекулярно-цитогенетический метод. Его часто используют в странах СНГ. FISH применяют для интерфазных и метафазных ядер. Способ позволяет выявить последовательность ДНК на исследуемой хромосоме. По цене он является самым недорогим методом диагностики. По времени исследование занимает около 4-5 часов. У FISH есть недостаток: его методика не позволяет проверить все хромосомы.

Еще fish-метод помогает:

1. Осуществить ПГД эмбрионов, которые являются носителями хромосомных перестроек.
2. Делать скрининг-исследование по часто встречающимся анеуплоидиям хромосом.
3. Сразу определять пол планируемого ребенка.

Метод CGH (сравнительная геномная гибридизация)

С его помощью можно проверить все хромосомы. Исследование занимает достаточно долгий промежуток времени. По цене оно дорогостоящее. Его особенность: полученные бластоцисты замораживают, а дальнейший перенос осуществляют с помощью . Кроме этого, этот метод проверяет эмбрионы, у которых хорошо выражен сильный потенциал к дальнейшей имплантации. Так же при CGH существенно снижается риск неверного диагноза, благодаря биопсии большого числа стволовых клеток.

Метод PCR

Он позволяет правильно диагностировать болезни, которые возникают по причине доминантных и рецессивных мутаций (например, такие заболевания как муковисцидоз, гемофилия). PCR выявляет хромосомные нарушения, определяет антигены и принадлежность эмбрионов по резусу. Методика ПЦР проверяет и близких родственников. То есть, кроме диагностики родителей, делают исследование родни на наличие моногенных заболеваний. Такие действие необходимы для выявления генных нарушений у эмбрионов.

Метод NGS

Расшифруем: Now-Generation Sequencing. Переводится как высокопроизводительное секвенирование. Это самая инновационная диагностика. При NGS проверяют последовательность ДНК, тем самым точно устанавливают генетическую патологию. Новая технология постепенно вытесняет первую методику FISH и находит обширное применение в зарубежных центрах ЭКО. Практика показала, что успех наступает в 70% случаев.

Подготовка к ПГД

Если есть необходимость совместить ЭКО с ПГД, то с парой проводит консультацию врач-генетик. Далее специалисты назначают будущим родителям полное обследование, для выявления всех перестроек, и обнаружения мутаций. Далее устанавливаются точные показания к ПГД. На последней стадии подготовки врач разъясняет всю суть программы ПГД и описывает этапы процедуры.

Этапы проведения ПГД

Рассмотрим этапы ПГД:

1. Первый этап начинается со стандартной схемы процедуры ЭКО. Заканчивается процесс этапом .
2. Проведение эмбриологической процедуры яйцеклеток и спермы, осуществление микроманипуляций. На третий день культивирования проводится процедура биопсии. Для этого у эмбриона забирают одну клетку с помощью специального микрохирургического инструмента. При биопсии используется механический, химический и лазерный метод. Далее проводят фиксацию бластомера. Кроме этого, может проводиться биопсия трофэктодермы и биопсия полярного тельца ооцита. В первом случаи из трофоэктодермы забирают 3-5 клеток (обычно они приходятся на внешний слой бластоцисты). Проводится биопсия трофэктодермы на 5 или 6 сутки и является достоверным вариантом выявления кариотипа аномального развития эмбрионов. Биопсия тельца ооцитов является самым наилучшим вариантом диагностического исследования при бесплодии с женской стороны. Генетическая информация в полярном тельце и в ядре яйцеклетки одинакова.
3. Проведение гибридизации ДНК-зондами. Под зондами понимают особую метку. У каждой единичной хромосомы имеется собственная метка. Она подсвечивается цветом под действием флуоресцента. Поэтому их идентификацию легко провести.
4. Получение визуализированной информации на экране монитора компьютера. Проведение диагностики блостмастеров, которые были зафиксированы. Получение окончательных результатов к 5 дню проведения культивирования. Здесь врачи проводят подсчет количества хромосом. Если их число соответствует принятому значению, то материал рекомендуется к дальнейшему переносу. Если вместо трех хромосом наблюдается две или вместо необходимых двух на экране визуализируется одна, то такой материал переносить не следует, он аномальный.
5. Перенос генетический здоровых эмбрионов на 5 день культивирования. Это время считается самым оптимальным. Материал для использования представлен в достаточном количестве и процедура биопсии для эмбриона не так травматична. Если перенести материал на третьи сутки, то возникнет высокая вероятность остановки процесса развития. Кроме этого, у трехдневного зародыша генетические клетки сильно отличаются. В результате можно получить ложные исследования.
6. Проведение после осуществления процедуры переноса.
7. Диагностирование долгожданной беременности с помощью теста (после подсадки обычно должно пройти две недели).

Возможные последствия ЭКО с ПГД

Помимо скринингового исследования беременной после ЭКО делают анализ амниотической жидкости и УЗИ нервной системы плода.

В зависимости от метода ПГД на диагностику потребуется от нескольких часов до нескольких дней. Весь цикл ЭКО составляет 4-6 недель. В этот промежуток входит и ПГД.

Процедуру ПГД проводят амбулаторно. Проведение седативной анестезии потребуется только при заборе яйцеклеток.

При ЭКО с ПГД возникают такие же риски, как и при ЭКО без ПГД. Это:

• Многоплодная беременность.
• Повреждение эмбриона на этапе изъятия клетки.
• Реакции на препараты, которые могут применяться при процедуре ЭКО. Это в основном головная боль, приливы крови и изменение настроения в худшую сторону.
• Наблюдается синдром овариального гипервозбуждения.
• Кровотечения после изъятия яйцеклетки.
• Чувствительные спазмы после процедуры изъятия.
• Исследование ПГД дает не сто процентный результат.
• Получения зачатия вне матки.

Противопоказания

ПГД несмотря на свою необходимость, эффективность и безболезненность имеет несколько противопоказаний к проведению:

1. Полученный эмбрион на 2 сутки своего развития имеет менее, чем 6 бластомеров.
2. Образование фрагментов эмбриона составляет больше, чем 30% (нормальное значение равняется 25%).
3. В эмбрионе присутствуют многоядерные бластомеры.

Генетическая диагностика как совершенный метод

Конечно, самый большой страх женщины, это родить генетически нездорового малыша. Метод ПГД позволяет отсеять генетически больных эмбрионов, тем самым сразу дает ребенку здоровье. Родителям не приходится бояться за здоровье долгожданных детей. Если кто-то полагает, что генетические исследования делают ребенка по шаблону, то это не так. Нельзя сотворить дизайнерский проект будущего младенца. Характер и индивидуальность совсем не зависят от полученных генов. Даже клонированные искусственным путем животные не схожи друг с другом. Гены отвечают за внешние данные.

ЭКО совместно с ПГД сильно повлияло на приговор «бесплодны». Точнее, это уже не приговор, а особенное заболевание, которое легко обходится с помощью ЭКО. Метод позволяет преодолеть ряд трудностей со здоровьем, а именно:

• Непроходимость маточных труб.
• Отсутствие маточных труб.
• Истощение яичников.
• Отсутствие длительное время процесса овуляции.
• Нарушение работы яичников.
• Спайки в малом тазу.
• Отсутствие половых желез.

Даже, если у женщины отсутствует матка, проблему все равно можно решить. Но при этом яичники ее должны нормально функционировать. Для этого у женщины забирают яйцеклетки, оплодотворяют их спермой супруга и помещают зародыш в тело другой женщины (например, родственницы или суррогатной матери).

ПГД абсолютно безопасная процедура. Процедуру диагностики делают на максимально малом сроке, когда из каждой забранной клетки может получиться полноценный организм. Вреда здоровью эмбриона не будет, соответственно, будущий ребенок так же будет здоров.

Генетика продолжает развиваться. Она позволяет заранее получить здоровое потомство и будущих родителей, у которых с большей вероятностью будут отсутствовать генетические заболевания. Взрослый человек реально оценивает будущее, он заранее хочет дать малышу полноценную жизнь и в дальнейшем от него получить потомство (внуков). Генетика в этом, безусловно, помогает.

Итак, метод предимплантационной генетической диагностики является дополнением ко всей программе ЭКО. Не стоит обращать внимание на стоимость процедуры. Если уже найдены деньги на само ЭКО, то остальные необходимые средства – это мизер. Здоровье ребенка не стоит такой экономии.

ПГД – все за и против для успешной беременности: предимплантационная генетическая диагностика эмбрионов

Стоит ли делать ПГД для повышения шансов успешного наступления беременности? Решение о проведении предимплантационной генетической диагностики вызывает массу споров на форумах будущих ЭКО-мам. Актуальность вопроса остается на пике, тем более что стоимость ПГД при ЭКО увеличивается. Так влияет ли анализ на вероятность наступления беременности?

• Цели и преимущества анализа
• Зачем делать ПГД при ЭКО?
• Показания к проведению
• Проводить диагностику или нет?
• Как проводится исследование?
• Этапы
• Отмена переноса после диагностики
• Подготовка к программе
• Что нужно сделать при наступлении беременности?

Цели и преимущества анализа ПГД

Предимплантационная генетическая диагностика ПГД при ЭКО – это метод исследования генома до переноса эмбриона в полость матки. Главная цель – выбор эмбриона для подсадки без генетических патологий, носителями которых являются родители.

Для успешной беременности важно перенести не просто качественный, но и «здоровый» в генетическом плане зародыш. Основное преимущество ПГД – это снижение риска , как самопроизвольных абортов, так и искусственного прерывания в случае выявления патологии на перинатальном этапе (т. е, когда беременность уже наступила).

Зачем делать анализ?

Положительный эффект от ПГД достаточно весом. Зачем же рекомендуют проведение анализа ? Анализ важен, так как он:

• увеличивает процент имплантации;
• снижает уровень самопроизвольных абортов;
• снижает уровень рождаемости детей с генетическими отклонениями (наиболее часто встречаемая патология – рождение ребенка с синдромом Дауна);
• дает возможность выбора одного, но самого лучшего эмбриона для трансфера в матку (позволяет избежать );
• способствует рождению здорового доношенного ребенка в срок;
• позволяет выбрать пол ребенка, что необходимо для предупреждения генетических отклонений, сцепленных с полом.

Недостаток ПГД – стоимость программы ВРТ повышается.

Показания к проведению ПГД при ЭКО

Проведение ПГД показано:

• супружеским парам с высоким генетическим риском (семейные случаи генетических заболеваний);
• женщинам старше 35 лет. С возрастом количество генетически аномальных эмбрионов значительно возрастает, а доля нормальных снижается.
• семейным парам, у которых возраст партнера превышает 45 лет;
• в случае если мужчина имеет тяжелые нарушения сперматогенеза, высокий процент аномальных сперматозоидов, или единичные половые клетки.
• женщинам с , особенно на ранних сроках беременности от 4 до 8 недель.
• парам после многократных .

Проводить анализ ПГД или нет?

Проведение ПГД актуально также для пар, которым переносили , но беременность не наступила. Одна из возможных причин – генетическое нарушение.

Эмбрион нормального качества может быть с нарушенным генотипом. Хорошее качество переносимой единицы – это не всегда качественный генотип.

Поэтому ПГД при ЭКО – это всегда вторая ступень отбора эмбрионов для переноса в полость матки. Первая ступень – продленная культивация до стадии бластоцисты. Первые три дня развитие зародыша происходит на материнских запасах. На 4 день включается в работу собственный геном. Грубые нарушения генетической информации в клетках блокируют дальнейшее развитие.

Как часто встречаются генетические отклонения у эмбрионов?

У эмбрионов отличного и хорошего качества достаточно большой процент изменений кариотипа (анеуплоидий), которые не позволяют нормально развиваться в дальнейшем. С данными в цифрах можно ознакомиться в таблице 1.

Таблица 1. Качество бластоцист и качество генетического набора хромосом

Можно сделать вывод, что в 25–39% случаев беременность могут дать эмбрионы удовлетворительного и неудовлетворительного качества, так как они генетически полностью «здоровы». Но для того чтобы их выявить, нужен анализ ПГД. Проведение диагностики на таких эмбрионах крайне затруднительно. Клеточного материала слишком мало и его достаточно трудно получить без ущерба для развивающегося организма. Риск остановки развития эмбрионов удовлетворительного и неудовлетворительного качества после биопсии очень высок. Чаще всего их не подвергают исследованию.

Метод ПГД – как проводится исследование?

В мире существует 4 метода проведения ПГД, для которых необходимо разное оснащение генетической лаборатории:

• Флуоресцентная гибридизация in situ – FISH. Наиболее доступный и чаще всего используемый метод в странах СНГ. По сравнению с другими он недорогой, требует немного времени – всего 4–5 часов. Его недостаток – он не позволяет исследовать все хромосомы.
• Сравнительная геномная гибридизация (CGH). Метод позволяет исследовать все хромосомы, достаточно дорогой, требует значительных временных затрат. При его использовании бластоцисты замораживают и перенос осуществляют в криопротоколе.
• Полимеразная цепная реакция (PCR). Позволяет исследовать моногенные хромосомные мутации и требует предварительной диагностики родителей. Вначале проводится обследование супружеской пары, выявляется наличие мутации (определяется в каком гене). И только после того, как ее выявили у родителей, мутацию ищут у эмбриона.

• Now-Generation Sequencing – метод ПГД, позволяющий исследовать все хромосомы и полиморфизмы (полный геномный анализ), очень дорогой. На сегодняшний день – это одна из высокоразрешающих технологий, которая позволяет исследовать не только хромосомный набор, но и мутации в любом из участков хромосом.

Этапы проведения ПГД

Исследуют генотип у трехдневных и пятидневных эмбрионов. В последнее время тенденция идет к тому, что анализ чаще выполняют 5-дневкам. Причина – возможность более точного анализа по результатам исследования не одной клетки, а нескольких. Для ПГД эмбриона третьего дня культивации берут 1 (максимум 2) бластомер. При анализе бластоцист делают забор 5–7 клеток из трофэктодермы (участок эмбриональной ткани, из которой развивается плацента). Клетки, из которых развиваются собственно органы и ткани ребенка в исследовании не участвуют.

Этапы проведения ПГД:

1. Биопсия эмбриона.
2. Фиксация ядер клеток на слайде (предметное стекло для работы под микроскопом).
3. Гибридизация ДНК-зондами. Зонд – это метка, каждой хромосоме соответствует своя метка, которая отличается цветом флуоресцентного свечения. Каждая пара хромосом светится определенным цветом, что позволяет их идентифицировать.
4. Визуализация на мониторе компьютера флуоресцентного микроскопа и интерпретация полученной информации. В каждом ядре подсчитывается количество хромосом. Если количество хромосом нормальное, то такую бластоцисту рекомендуют к переносу. Если выявляется трисомия (три хромосомы вместо двух) или моносомия (одна хромосома вместо двух) – эмбрион не рекомендован к переносу. Он аномальный.

На какой день лучше провести ПГД на 3 или на 5?

Последние исследования показали, что биопсия эмбрионов для ПГД на третьи сутки дает высокий риск остановки развития. Плюс к этому у зародыша на 3 сутки высокий уровень мозаицизма (клетки генетически отличаются), что влечет появление ложных результатов и повышает процент ошибки.

Широко используется ПГД эмбриона на 5 сутки, поскольку биопсия для него менее травматична, а материала для исследования больше.

Другие преимущества ПГД для удачного ЭКО:

• бластоцисты легче переносят биопсию;
• выше частота наступления беременности;
• низкий риск остановки развития.

Существует понятие «полная бластоциста» – это когда произошла полная дифференциация клеток эмбриона и под микроскопом четко видна внутриклеточная масса и трофэктодерма. Именно таким бластоцистам делают предимпланационную генетическую диагностику.

Существует понятие «ранней бластоцисты». У них дифференцировка еще не завершилась. Такие эмбрионы не подвергают биопсии, а продолжают культивацию до 6 суток и после завершения дифференцировки делают ПГД.

Отмена переноса после ПГД

Процент отмены подсадки эмбрионов после ПГД достаточно высок, и его уровень растет вместе с возрастом женщины. Часто бывает, что после исследования нет эмбриона, пригодного для переноса. У женщин старше 40 лет процент выбраковки эмбрионов составляет 25%.

У одной из четырех женщин после обследования ПГД качественных эмбрионов в генетическом отношении нет вовсе, и перенос не проводится.

Риски ПГД

Обследование инвазивное, поэтому существуют риски для самого зародыша и риски недостоверности полученных данных обследования:

• риск повреждения эмбриона при биопсии, особенно это касается 3 дневных эмбрионов;
• риск биологической ошибки при высоком уровне мозаицизма;
• риск нарушения работы оборудования или недостаточная квалификация доктора.

Подготовка к программе ЭКО с ПГД

Перед программой ЭКО с ПГД обязательно проводится консультация врача-генетика.

Подготовка к ЭКО + ПГД включает:

• обследование пары (кариотипирование, выявление мутаций, перестроек);
• определение показаний к ПГД;
• разъяснений сути программы, возможных рисков и ошибок, точности метода.

Также важно оговорить с доктором тактику поведения в случае малого количества эмбрионов (на одном эмбрионе не целесообразно проводить ПГД). А также действия при отсутствии эмбрионов на перенос по данным генетического исследования.

При наступлении беременности после удачного ЭКО с ПГД

С успешным наступлением беременности после ЭКО с ПГД женщину ожидает тщательное наблюдение с проведением ультразвукового скрининга, перинатального скрининга в первом и втором триместре, как при естественной беременности.

При выявлении патологии или отклонений от нормы принимается решение о необходимости инвазивной перинатальной диагностики. Это довольно сложная процедура, приравнивается к операции и проводится в стерильных условиях. Ее цель – получить биопсийный материал – ворсинки хориона, плаценту или околоплодные воды для анализа. Полученные образцы исследуют и ставят диагноз.

В случае спонтанного прерывания беременности проводится генетическое обследование абортивного материала.

Стандартные наборы для диагностики

Для исследования широко используются стандартные наборы. С их помощью можно диагностировать нарушения в 3 хромосомах (X, Y и 21 пара), в 9 (13, 18, 21, 15, 16, 17, 22, X, Y) или можно исследовать 24 хромосомы. При необходимости клиника заказывает индивидуальный набор для ПГД диагностики компании производителю.